非洲猪瘟的临床诊断(非洲猪瘟临床诊断检测)

农村养殖畜牧网养猪技术 2023-08-17 21:23:581400

ASF 的准确、快速诊断对于防止 ASF 蔓延、快速扑灭和根除尤其重要。ASFV 自然感染的潜伏期大约为 4—19天 (Wardley et al., 1983)，感染后 7-10 天可检测到抗体。

一个地区或猪场首次暴发 ASF 时呈最急性、急性感染临床症状，感染猪只表现为急性出血、死亡，由于首次暴发时发病猪只在抗体出现前就已经死亡，此时首选抗原检测 *** 。随着病毒循环和扩散，其毒力会下降，感染猪只表现

为亚急性和慢性感染临床症状 (Bech-Nielsen et al., 1995;

Penrith et al., 2004; Wardley et al., 1983)，此时抗体检测

更适用于疫情的监测和 ASF 根除计划。

一、临床诊断

ASF 的临床症状和许多其他猪的疾病很相似，特别是猪瘟、猪丹毒和猪高致病性蓝耳病等。鉴别诊断依靠病原学或血清学诊断。

ASFV 感染后，发病率一般在 40-85% 之间，死亡率由 ASFV 毒株的毒力决定。高致病性毒株死亡率可高达 90-100%；中致病性毒株在成年动物能引起20-40% 的死亡率，在幼年动物中引起 70-80% 的死亡率；低致病性毒株能够

造成 10-30% 的死亡率。特急性型 ASF 表现为突然死亡，临床症状不明显。

急性症状表现为食欲减退、发热（40-42℃）、肺水肿、淋巴组织广泛坏死和出血、皮下出血和高死亡率 (Gomez-Villamandos et al., 1995b; Mebus, 1988)。亚急性或慢性感染有时可能会出现鼻出血、便秘、呕吐，出血性腹泻。在四肢、耳、胸部、腹部和会 *** 位出现不规则的出血斑，这些症状在感染中等致病毒株的猪中较为明显。

全身脏器出血、坏死是 ASF 的主要临床表现，具体表现为皮下出血，淋巴结广泛出血和坏死，严重时呈黑色。肺水肿。脾脏肿大、质脆变脆，肾脏、肠系膜和浆膜出血

二、病原学诊断

病原学诊断依赖于活病毒、抗原、基因组的检测，

包括病毒分离、抗原 ELISA、荧光抗体检测（FAT）、

PCR 和等温扩增分析等方法。目前实时荧光定量

qPCR(Quantitative real-time PCR，qPCR) 使用最为广泛，

对 ASFV 诊断具有很高的灵敏性和特异性。

ASFV 主要在网状内皮系统的细胞内复制。可采集的临床样品包括抗凝血（EDTA）、脾脏、肝脏、淋巴结和扁桃体 (PJ, 1989)。若需病毒分离，样品运送过程中需保持

低温冷藏，不能冷冻。

1、病毒分离

ASFV 可以从血液、脾脏、肝脏、淋巴结和扁桃体等组织中分离。红细胞吸附（HAD）实验可用于ASFV检测。但是后来发现部分 ASFV 毒株呈现 HAD 阴性。

2、荧光抗体检测（FAT）

用疑似感染 ASF 的猪组织 *** 涂片或冰冻切片，内源性的抗原可与特异性的 AFSV 荧光抗体结合，显微镜直接观察结果。优点是快速、特异高，对于急性病例的诊断灵敏度较高，但对亚急性或慢性 AFS，由于自身抗体会阻断荧光抗体与抗原的结合，容易出现假阴性结果。

3、抗原 ELISA

病毒抗原也可用 ELISA 检测，但只推荐在急性病

例时使用，灵敏度没有 PCR 检测 *** 高 (Steiger et al.,

1992)。之一个直接 ELISA 检测 ASFV 的 *** 能检测的抗原

浓度是 50-500 HAD50/ml (Wardley et al., 1979)。后来基

于 VP72 单抗的双抗夹心法 ELISA 具有较高的灵敏性 (Vidal

et al., 1997)。

目前 qPCR 被认为是 ASFV 基因检测的金标准，被用在 OIE 所有的区域性参考实验室。血液、血清和组织样本都可用于qPCR检测。优点是快速、敏感性和特异性都很高。能够检测出所有 ASFV 毒株（23 个基因型），甚至因保存不当而降解的样本也可用于检测 (Boshoff et al., 2007)。但容易因交叉污染出现假阳性的结果，此外，因 PCR 抑制物及核酸降解出现的假阴性也应该注意。

King 首次报道 TaqMan 探针荧光定量 PCR 检测方

法 (King et al., 2003)，该 *** 在 OIE 推荐 *** ，引物针

对 VP72 保守区域，有很高的特异性和灵敏度，针对 25 种

ASFV 毒株和 16 种非洲及欧洲的软蜱 ASFV 毒株，灵敏度

达到 10-100 个核酸分子。