2017 年和 2018 年期间，在加利福尼亚州的几个商业接种疫苗的蛋鸡群中检测到传染性稻瘟病菌。从感染鸡中分离出的副鸡禽杆菌菌株随后被鉴定为基因型 C 和血清型 C-2。这种血清型和基因型包含在可商购的疫苗中，并用于加利福尼亚的商业蛋鸡。
接种灭活商业疫苗和自体疫苗的商业母鸡使用不同的疫苗接种方案接受副鸡禽杆菌
的攻击。
用于攻击的副鸡禽杆菌分离株选自 2017 年从爆发期间感染的层中恢复的野外菌株。收集了关于临床疾病、呼吸道症状、产蛋量和感染后细菌脱落的信息。
材料和 ***
鸡只。加州大学戴维斯分校家禽医学研究机构接收了 120 只 21 周大的 海兰W-36 母鸡。将鸡分成 12 组，每组 10 只母鸡。
病原体和抗体筛查
采集血样，并筛查血清中是否存在针对 AI、IBD、IBV、MS、MG 和 NDV 的抗体。收集拭子用于检测 AMPV、ILT、MG、MS、IBV 和副鸡禽杆菌(AP)。
细菌培养AP
细菌培养物是从在金黄色葡萄球菌划线的血琼脂上分离的临床病例获得的。使用 qPCR 进行滴定。
实验设计
将 21 周龄的母鸡分成 12 组，每组 10 只母鸡。AP 疫苗在 6 周龄和 10 周龄时接种。各组分别给药：一剂自体疫苗、两剂自体疫苗、一剂商业疫苗、两剂商业疫苗或一剂商业疫苗，然后是一剂自体疫苗，并被细分为攻击组和非攻击组-挑战群体。此外，我们评估了未接种疫苗的对照组，这些对照组要么受到AP 的攻击，要么没有受到攻击。在 22 周龄时使用滴度为 5 x 10 3的 AP进行挑战200uL 的 cfu。将 50 微升接种物应用于每只眼睛和鼻孔。在第 3 天和第 8 天收集后鼻拭子
post challenge (dpc) 来测量AP负载。评估每日产蛋量、临床和呼吸道症状。在 8 dpc 对鸡进行尸检。收集大体病理学信息。
临床体征评分为 0 至 3：0 = 无体征；1 = 水样泡沫状眼睛和/或鼻腔分泌物；2 = 鼻腔分泌物和眶下窦肿胀和 3 = 伴有或不伴有结膜炎和冷漠的严重肿胀 (1)。呼吸体征评分为 0 至 3 分：0= 无体征，1= 轻微鼻音，2= 气管罗音，3= 可从远处听到气管罗音 (3)。
结果
在实验之前，对商业母鸡进行血清学筛查，以确定是否存在针对可能影响实验挑战临床结果的病原体抗体。针对 IBD、IBV 和 NDV 的阳性滴度反映了对母鸡实施的疫苗接种方案。MS 在 95% 的测试样本中对抗体呈阳性，而 MG 在 5% 中呈阳性。10% 的样品进行了 ILT 的分子检测，3% 的 MG，96% 的 MS，2.5% 的 IBV。所有鸟类在攻击前均为AP阴性。
虽然未检测到产蛋量的统计学差异，但检测到临床体征指标的差异。接种一剂商业菌苗然后接种自体疫苗的组记录到显着减少的临床体征（P<0.05）（图1）。
虽然细菌载量 3dpc 并未显示细菌脱落减少，但在 8dpc 时，我们检测到在 6 周龄和 10 周龄时接种两剂商业菌株的组的脱落显着减少 (P<0.05)，证明了有效性的商业疫苗。在接种一剂商业疫苗和两剂自体疫苗的母鸡组中检测到脱落减少具有显着意义 (0.05<p<0.01)（图 2 ）。
呼吸道症状在攻击后两天开始出现，并持续整个实验期。组间未检测到差异（接种疫苗与未接种疫苗的对照）。在所有接种疫苗和未接种疫苗的鸟类中，大体病理学的特征是腹膜炎（20-40% 的禽类）和肝周炎（10-50%）AP挑战。
图2 -副鸡禽杆菌负荷(40-Cq) 8 dpc由眶下拭子测量。上标字母表示统计显著性。
讨论
复杂的上呼吸道疾病在生产环境中很常见。攻击前，禽类在最后一次接种 ILT 疫苗后 19 周呈 ILT 抗原阳性，在最后一次疫苗接种后 12 周呈 IBV 抗原阳性。这说明了一种复杂的情况，在这种情况下，疫苗病毒可能会在受影响的场所表现为滚动反应。在我们的实验中，临床症状支持除了受控鼻炎暴露之外的共同挑战的协同效应的复杂情景。8 dpc 的细菌载量证明了两剂商业疫苗应用的中和作用。该结果与被表征为 C 基因型、血清型 C-2 菌株、与 AP 相同的血清型的细菌的基因分型和血清型相关包含在疫苗中。
该领域描述的临床体征与在病理上表现为败血症病变的复杂鼻炎病例同义。这些病例通常与同时感染多种病原体有关，而且通常不仅仅是鼻炎引起的。需要特别注意替代系统，其中已检测到更高的颗粒物和氨 (2, 4) 以及更高的革兰氏阴性菌浓度 (5)。这些环境变化可能会引起上呼吸道 *** 和炎症，改变呼吸道微生物群并最终促进与 IBV、AP等病原体的共同感染, 和 ILT 从而产生复杂的上呼吸道感染。dpc 后观察到的大体病理是复杂传染性鼻炎病例的特征。
致谢本文原作者：RA Gallardo A、S. Stoute B、HL Shivaprasad B、A. Paula Da Silva A、S. Egaña A 和 G. Cutler C
